Agglutinines froides - Conseils techniques

Un blogue d’Eric Ching :

Un cas d’agglutinine à froide a été présenté lors de la récente journée éducative de la SCMT à Prince George; j’ai été surpris que le temps d’incubation utilisé soit de 24 heures ! 

Dans les années 70, en travaillant à la Croix-Rouge de Calgary, un titrage d’agglutinine à froide était  incubé pendant 30 minutes à 4^oC.

Lorsque j’ai commencé à travailler à temps partiel à l’Hôpital de Foothills, une procédure intitulée « dépistage d’agglutinine froide » était utilisée et exigeait un temps d’incubation de seulement 15 minutes. Cette procédure a été mis en place et a été utilisée depuis la fin des années 60 pour déterminer si une agglutinine froide était présente et  provoquait des réactions non spécifiques ou panagglutination ou pour établir le diagnostic « maladie d’agglutinine froide » chez les patients.  Le titrage des agglutinines froides était également incubé pendant 15 minutes seulement. Cette procédure a été utilisée par les hématologues locaux pendant des décennies! Des décennies de validation clinique ont certainement justifié son utilisation continue. (Manuel technique AABB- incubation de 30 à 60 minutes pour la détermination de la spécificité de l’agglutinine froide ; 60 à 120 minutes pour le titre)

 Procédure :

• 4 tubes étiquetés : Auto, SI, SII et Cordon
• deux gouttes de sérum/plasma du patient dans chaque tube, suivies de l’ajout des globules rouges du patient, des cellules de dépistage et des cellules du cordon du groupe O
• mélanger et incuber pendant 15 minutes à 4^oC
• centrifuger et lire.

Un 3+ à 4+ entraînerait le titrage d’agglutinine froide chez un patient. Une dilution de 1/10 de l’échantillon du patient était faite si le résultat était négatif et l’analyse reprise pour  voir si un phénomène de prozone avait eu lieu. Je crois que c’est la seule occasion  dans la sérologie de routine du groupe sanguin où le phénomène de prozone pourrait causer un résultat faussement négatif. Je pense que phénomène de prozone est différent du « phénomène de blocage » du réactif anti-D avec des globules rouges de bébé fortement enrobés d’ anti-D IgG maternel où l’encombrement  et les sites occupés sont la cause d’un résultat faussement négatif plutôt que d’un excès d’anticorps présent dans le phénomène de prozone. SVP, faites -moi savoir si j’ai une mauvaise compréhension de cette partie. 

Veuillez nous faire part de vos réflexions sur cette procédure et je suis sûr qu’il y a des variations à différents endroits.

Défis techniques d’un fort autoanticorps froid:

• Détermination de l’ABO/Rh : utiliser un sérum AB inerte ou un antisérum contrôle pour s’assurer que les globules rouges du patient ne s’agglutinent pas entre eux. - Si c’est le cas, vous pouvez laver les globules rouges du patient de 3 à 6 fois à l’aide d’une solution saline conservée à 37^oC. Je préfère  45^oC car j’ai trouvé que c’est plus efficace et  ne causera pas d’hémolyse importante. Le ZZAP (WARM^TM) est toujours efficace car il contient du DTT  0,2M qui détruit la chaîne articulaire de l’IgM pentamérique, rendant ainsi les agglutinines froides non-agglutinables. Si le DTT est disponible dans votre laboratoire, vous pouvez simplement fabriquer  une solution de 0,01M.
• Autoadsorption à froid : avez-vous une procédure spéciale de prélèvement qui consiste à prendre deux béchers, l’un avec de la glace et l’autre avec de la saline physiologique réchauffé à 40-45^oC,  garder le tube EDTA dans de l’eau chaude et à placer l’échantillon coagulé dans la glace ?
• Pour éviter qu’une contamination ne provoque un titre faussement élevé, changez la pipette jetable ou l’embout de la pipette pour le transfert  d’un tube à l’autre. Lors de double dilutions, utiliser des dilutions mères  de 0,5 ml pour avoir une meilleure reproductibilité.
• Demandez toujours le diagnostic du patient (actuel ou passé, si disponible) cela  pourrait vous aider à déterminer une  spécificité.
  • Anti-I : Maladie des agglutinines froide (aussi connu sous le nom d’hémagglutinine à anticorps froids, syndrome d’agglutinine froide), Pneumonie atypique due à une pneumonie aux Mycoplasmes et phénomène de Raynaud  et désordre lymphoprolifératif. 
  • Anti-i : mononucléose infectieuse, macroglobulinémie de Wadenstrom et lymphome
  • Anti-P : Hémoglobinopathie paroxystique froide IgG (Hémolysine biphasique PCH)  alias anticorps Donath-Landsteiner
  • Anti-Pr : autoanticorp IgG froid rare qui pourrait causer une hémolyse intravasculaire aiguë
• Pour des raisons académiques, les antigènes I et i ne sont PAS les seuls antigènes qui présentent une différence significative de réactivité entre les globules rouges adultes et ceux du cordon.
  • Adulte > Cordon : I, Lud, Fl, Rx
  • Cordon > Adulte : i, Vo, Li
  • Adulte = Cordon : Pr, Me, Om, Ju
• Vous trouverez de plus amples renseignements dans le manuel de Geoff Daniel ou dans la revue de Roelcke dans Trans Med Rev 1989; 3:140-166, si vous voulez voir comment la sialidase, la papaïne et le lait humain peuvent différencier diverses spécificités.
• L’amplitude  thermique de l’agglutinine froide est plus importante sur le plan clinique que la concentration (titre). En utilisant une technique de préchauffage, j’ai utilisé 4 points de température pour déterminer la plage thermique : 37oC, 30oC et TP, je commencerais avec le 37oC et arrêterais à la température à laquelle la réaction est vue.

Je me souviens qu’à quelques reprises, habituellement au début de l’hiver, mon patron, le Dr BA Ruether, est venu à la banque de sang avec ses résidents et ses étudiants en médecine.  Il demandait à une technologiste de trouver un échantillon d’EDTA dans le réfrigérateur. Il disait "remarquez la couleur anormale du plasma et pas de globules rouges qui coulent librement!"  Il demandait alors : « Qu’attendez-vous des résultats hématologiques ? »
 
J’espère qu’un hématopathologiste donnera à nos collègues techniques un bref aperçu des résultats de laboratoire du syndrome d’agglutinine  froide.

Je vous invite à me faire part de vos commentaires.

Eric